Principes de base de la sélection des peptides antigéniques

Afin d’obtenir les meilleurs résultats dans la production d’anticorps, il est nécessaire de concevoir avec soin le peptide antigène.
La conception doit répondre à une condition de base : pendant le processus d’immunisation, l’antigène ne produira pas de réponse immunitaire excessive, mais en même temps, il pourra produire des anticorps capables de se lier à la protéine d’intérêt.
Bien que la conception d'antigènes soit un sujet très complexe avec de nombreux détails auxquels il faut prêter attention, sur la base de notre expérience accumulée, plusieurs principes de conception de base clés peuvent être fournis à titre de référence. :

Lors du démarrage d’un nouveau projet de recherche, il est nécessaire de clarifier certaines propriétés fondamentales de la protéine d’intérêt, surtout si connaître la structure de la protéine sera d’une grande aide pour sélectionner des régions de reconnaissance auxquelles l’anticorps peut facilement accéder et reconnaître. Cependant, en l’absence d’informations structurelles aussi précises (ce qui est généralement le cas), la compréhension du but de l’étude affecte la stratégie de conception des peptides. Par exemple : si la recherche se concentre sur différentes régions de la protéine, par exemple l'extrémité C ou N, ou sur la protéine dans un état spécifique, comme la phosphorylation, etc., alors le polypeptide conçu selon la séquence requise et l'anticorps correspondant généré ne devraient pas avoir beaucoup de difficultés d'application. Cependant, la conformation de la protéine affectera l’interaction entre l’anticorps et sa région de reconnaissance. Un problème possible dans cette situation est que si dans la protéine repliée la région de reconnaissance est cachée à l’intérieur de la protéine, l’anticorps ne pourra pas accéder à cette région. (Impossible d'interagir).

D’une manière générale, la région de reconnaissance antigénique la plus idéale doit être hydrophile, située à la surface de la protéine et structurellement déformable. Parce que dans la plupart des environnements naturels, les régions hydrophiles ont tendance à être concentrées à la surface des protéines, tandis que les régions hydrophobes sont souvent enveloppées à l’intérieur de la protéine. Pour la même raison, les anticorps ne peuvent interagir qu’avec les régions de reconnaissance situées à la surface des protéines. Lorsque ces régions de reconnaissance ont une déformabilité structurelle suffisante pour se déplacer vers des positions où l'anticorps peut entrer en contact, elles auront une affinité élevée avec l'anticorps.

Une région continue fait référence à une région de reconnaissance composée de séquences continues d'acides aminés. La plupart des anticorps sont dirigés contre des régions de reconnaissance continue. La capacité des anticorps à se lier à de telles régions avec une affinité élevée indique que cette séquence ne se trouve pas à l'intérieur de la protéine. La région de reconnaissance discontinue représente une séquence polypeptidique avec un certain pli, ou la région de reconnaissance d'un anticorps qui relie deux polypeptides distincts entre eux. Dans certains cas, des anticorps contre de telles régions de reconnaissance discontinues peuvent également être produits, mais le polypeptide antigénique utilisé pour l'immunisation doit avoir une structure secondaire similaire à la région de reconnaissance discontinue, et la longueur de la séquence doit répondre aux exigences pertinentes.

Pour éviter le risque que la région de reconnaissance soit cachée à l’intérieur de la protéine, nous recommandons généralement de choisir des anticorps correspondants N, C produits aux deux extrémités. Parce que dans les protéines intactes, N, C Les deux extrémités sont généralement exposées à la surface de la protéine. Cependant, il est important de noter que les protéines membranaires C L'extrémité est trop hydrophobe et ne convient pas comme antigène.

Généralement, nous recommandons que la longueur de séquence du polypeptide antigène soit comprise entre 8-20 résidus d'acides aminés. S'il est trop court, il y a un risque que le peptide soit trop spécial et que l'affinité (capacité de liaison) entre l'anticorps produit et la protéine naturelle ne soit pas assez forte. De même, si la longueur de la séquence dépasse 20, il est possible d’introduire des structures secondaires et les anticorps produits peuvent perdre leur spécificité. De plus, plus la chaîne peptidique est longue, plus sa synthèse est difficile, ce qui rend difficile l’obtention de produits de haute pureté.

Principes de base : Ajouter la protéine porteuse à l'extrémité éloignée de la région de reconnaissance des anticorps, qui n'est pas incluse dans la séquence. Cys Dans le cas de l'extrémité N ou C plus Cys La méthode préférée pour la réticulation-.

MacVecpour TM ; Étoile DANTM ; PC-Gene TM