Réactifs pour la condensation des peptides

À l'heure actuelle, dans la synthèse des peptides, les méthodes d'activation carboxyle sont principalement utilisées pour compléter les réactions peptidiques. Les premières méthodes utilisées consistaient à activer les acides aminés en chlorures d'acide, azides, anhydrides symétriques et anhydrides d'acides mixtes. Cependant, en raison de l'existence d'une racémisation des acides aminés dans ces conditions, du danger des réactifs de réaction et de la complexité de préparation, ils ont été progressivement remplacés par des réactifs de condensation ultérieurs, qui peuvent être divisés en deux types selon leurs structures. : Les principaux réactifs de condensation sont : type Carbodiimide, type sel d'onium (Uronium).

Inclut principalement : DCC, DIC, EDC.HCl en attente. utiliser DCC effectuer la réaction, grâce au DCU, exister DMF Il a très peu de solubilité et produit un précipité blanc, il n'est donc généralement pas utilisé dans la synthèse en phase solide-. Cependant, comme il est bon marché, il peut être éliminé par filtration en synthèse en phase liquide-, et il est encore largement utilisé. EDC.HCl En raison de sa solubilité dans l’eau, il est souvent utilisé en association avec des polypeptides et des protéines, et il est également très efficace. Cependant, l’un des plus grands inconvénients de ce type de réactif de condensation est que s’il est utilisé seul, il y aura davantage de réactions secondaires. Cependant, les recherches montrent que s'ils sont ajoutés pendant le processus d'activation HOBt, HOAt, ces réactifs peuvent contrôler les réactions secondaires dans une plage très faible. Le mécanisme de réaction est le suivant :

Figure 2 Mécanisme de réaction d'activation DIC

Les réactifs de condensation de type sel d'onium ont une réactivité élevée et une vitesse rapide, et sont maintenant largement utilisés, notamment : HBTU, TBTU, HATU, PyBOP wait. Lors de l'utilisation de ce réactif, une base organique doit être ajoutée, telle que la diisopropyléthylamine (DIEA), la N- méthylmorpholine (NMM). L'acide aminé ne peut être activé qu'après l'ajout de ce réactif. Le mécanisme de réaction est le suivant :

Les résines utilisées dans la synthèse peptidique en phase solide-sont généralement des matériaux à base de polystyrène-divinylbenzène, avec des tailles allant de 75 à 150 μm. Le degré de réticulation-est compris entre 1-2 %, et la plupart de ceux utilisés actuellement sont de 1 %, car à ce degré de réticulation, la résine DMF, DCM Il a de bonnes propriétés de gonflement et a un structure de réseau tridimensionnelle-et les molécules réactives peuvent se déplacer librement à l'intérieur de la résine. La partie la plus critique de la résine est le bras de connexion, qui est relié à la résine à une extrémité et sert de site de réaction à l'autre extrémité. Les résines actuellement largement utilisées sont : PAM, MBHA, Wang, 2-Cl-Trt, Rink-Amide-MBHA wait. dans le PAM, le MBHA est utilisé dans la stratégie BOC, car il est très stable aux acides, il doit être HF, TFMSA Il ne peut être coupé que dans des conditions acides fortes.

Une fois la synthèse peptidique en phase solide-terminée, un réactif de clivage approprié doit être sélectionné pour cliver le peptide de la résine, puis précipiter avec de l'éther glacial, collecter le précipité par centrifugation et HPLC. Séparer, purifier et lyophiliser-pour obtenir le produit peptidique final.

En raison des différentes résines et séquences d'acides aminés sélectionnées, les méthodes de clivage sélectionnées lors du clivage ne sont pas exactement les mêmes. Généralement, les conditions de clivage sont sélectionnées dans des conditions acides. Pour le PAM, la résine MBHA, la coupe HF généralement utilisée, le p-crésol, le p-mercaptophénol, l'anisole et d'autres réactifs doivent être ajoutés pendant le processus de découpe. Et pour Wang, Rink-Amide, Trt Resin, généralement utilisé TFA Cutting, ajoutez de l'éthylène glycol, du sulfure d'anisole, de l'eau, du triisopropylsilane, du phénol, etc. pendant le processus de coupe.

Ces réactifs additifs sont principalement utilisés comme réactifs de capture des carbocations. Le but est de capter le carbocation généré lors de la réaction de clivage et de réduire les réactions secondaires provoquées par l’attaque de ces ions carbocation sur certaines chaînes latérales d’acides aminés. Les acides aminés les plus susceptibles de produire des réactions secondaires comprennent : Trp, Tyr. Le dosage du réactif de coupe est généralement de 10 à 15 ml/g de résine.

Rapports de coupe couramment utilisés : HF/p-crésol/p-thiocrésol(90/5/5), TFA/TIS/EDT/H2O(94/1/2,5/2,5), la réaction est généralement effectuée à température ambiante 2 h-4 h.

Dans la synthèse peptidique-en phase solide, nous rencontrons souvent le problème de l'échec de la synthèse peptidique ou d'une faible efficacité de synthèse. La raison principale est due à la séquence peptidique, car certaines séquences peptidiques se forment sur la résine.. -Le pliage modifie les propriétés de gonflement de la résine et peut également enfouir les sites actifs de la réaction dans la résine, ce qui rend difficile le déroulement de la réaction. Les rapports actuels indiquent que

Utiliser des solvants mixtes, DMSO/DMF, solution 6N Guanidine/DMF

Augmentez la température de réaction ou utilisez la méthode des micro-ondes

Utilisez des sels chaotropiques, LiCl, NaClO4 attendez.

Utilisez des résines PEG -PS présentant de meilleures propriétés de gonflement, tout en réduisant la charge de résine (0,05-0,2 mmol/g).

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