Deux méthodes pour cliver les peptides des résines en phase solide-
Une méthode pour cliver des polypeptides à partir de résines en phase solide-
Fmoc en phase solide Après la synthèse chimique des peptides, il existe de nombreuses méthodes de clivage. Nous allons maintenant présenter deux types de base couramment utilisés par tout le monde.
1. Méthode à l'acide fort (TFA couramment utilisé)
Placez la résine sèche dans un flacon shaker et ajoutez la quantité appropriée de piégeur (Scavengers), réactif de clivage, acide trifluoroacétique (TFA), 10-25 ml/g de résine, couvrez et agitez par intermittence à température ambiante. Filtrer la résine avec du TFA neuf. Lavez la résine 2 à 3 fois, combinez le filtrat et ajoutez goutte à goutte 8 à 10 fois le volume d'éther glacial. Parfois, une partie peut être éliminée à la vapeur du TFA. Un précipité peptidique brut a été obtenu. L'éther diéthylique peut être refroidi avec de la glace pour améliorer l'efficacité des précipitations. Enfin, récupérez le peptide brut précipité.
Résine applicable :résine king ou résine Amide Rink
2. Méthode à l'acide faible (TFA dilué ou acide acétique)
1% AGT :
sera 1 g La résine suspendue polypeptide - a été ajoutée à une solution contenant 1% de TFA. Le flacon à secousses en verre de solution de dichlorométhane a été scellé et agité pendant 2 minutes. Utilisez de l’azote pour verser le filtrat dans un autre nouveau flacon de méthanol contenant 10 % de pyridine. Répétez l'opération ci-dessus 10 fois. Utiliser 30 ml de DCM, 30 ml de MeOH. Laver les peptides protégés restants sur la résine trois fois de manière séquentielle. par CCM ou HPLC Vérifiez les résidus de nettoyage. Mélanger tout le filtrat et évaporer le solvant sous pression réduite pour laisser 5 % de volume. ajoutez 40 ml d'eau et de la glace-refroidit le mélange pour faciliter la précipitation. Après filtration, laver le produit trois fois à l'eau claire et le placer dans une boîte de séchage sous vide pour utilisation. KOH ou P2O5 Laisser sécher.
diluer l'acide acétique :
utiliser AcOH/TFE/DCM (2:2:6) Traitez les peptides accrochés à la résine avec une solution de coupe pendant 2 heures, filtrez la résine et lavez la résine trois fois avec une solution de coupe. Ajouter 15 fois le volume de n-hexane au filtrat mixte et évaporer par rotation pour éliminer l'excès d'acide acétique. Les méthodes de récupération des peptides sont détaillées ci-dessous.
Résine applicable :2- Résine CTC