Dissolution des polypeptides
Chaque acide aminé possède des propriétés chimiques inhérentes et la solubilité d'un peptide dépend de sa séquence et de ses modifications. Nous vous recommandons de prendre une petite quantité de peptide pour tester la solubilité avant de dissoudre tous les peptides.
La dissolution des peptides est une étape très importante. Une solubilisation inappropriée peut entraîner une perte de peptide ou un échec expérimental. La solubilité des peptides dépend principalement de la séquence du peptide, faites donc attention lors de la conception du peptide. Il est recommandé que la séquence peptidique contienne 20 % de résidus chargés pour augmenter sa solubilité.
Avant utilisation, les clients peuvent suivre les trois principes de base suivants pour choisir un solvant approprié pour dissoudre le peptide.
Premièrement, le solvant choisi doit être capable de dissoudre complètement le peptide ; Deuxièmement, le solvant choisi doit être compatible avec les conditions expérimentales ; Enfin, le solvant choisi ne doit pas réagir avec ou dégrader le peptide.
Tant que la quantité de peptide le permet, vous pouvez d’abord dissoudre une petite partie du peptide, puis dissoudre la totalité de l’échantillon. Si vous devez récupérer le peptide à partir d’un solvant, vous pouvez choisir un solvant initial qui facilite son élimination après lyophilisation.
Les suggestions suivantes peuvent vous aider à dissoudre les peptides :
Les peptides contenant moins de 5 acides aminés sont généralement solubles dans les solutions aqueuses, à l'exception des acides aminés fortement hydrophobes (W, I, L, F, M, V, Y).
If the charged amino acids are evenly distributed throughout the sequence, then contains >25%Acides aminés chargés (E, D, K, R, H) de peptides hydrophiles et contenant<25%Peptides with hydrophobic amino acids are generally soluble in aqueous solutions. The purification system for peptides is generally 0.1% TFA/Water and 0.1% TFA/ ACN. Therefore, if the peptide is dissolved in a buffer with no or very weak buffering capacity, the result may be an acidic peptide solution. When using other methods to dissolve peptides, be sure to use a solvent that is pH The value is nearly neutral. acidic peptide (E+D The number of residues is more than K+R+H number of residues) and basic peptides (K+R+H The number of residues is more than E+D number of residues) in neutral pH value conditions than in acidic pH value is easier to dissolve.
For hydrophobic amino acid content is 50% ～75%peptide, even if the sequence contains >Les acides aminés chargés à 25 % peuvent également être insolubles ou partiellement solubles dans l’eau. Il est préférable de dissoudre d'abord le peptide dans une quantité minimale d'un solvant organique fort tel que le DMF, l'ACN, l'alcool isopropylique, l'éthanol, l'acide acétique, le GdnHCl 4-8 M, l'urée ou le DMSO (pas dans la séquence C, W, M) et d'autres solvants organiques similaires. Il est préférable d'ajouter lentement le solvant organique qui dissout le peptide dans la solution aqueuse, goutte à goutte. Si la solution devient trouble, elle peut avoir atteint la limite de solubilité et il ne sert à rien de continuer à la dissoudre. Il est à noter que le solvant initialement choisi doit être compatible avec le système expérimental.
Hydrophobic amino acid content >75 %Les peptides fortement hydrophobes sont généralement également insolubles dans les solutions aqueuses. De tels peptides doivent également être traités d'abord avec des solvants organiques puissants (par exemple TFA, acide formique) qui se dissolvent et peuvent également précipiter s'ils sont ajoutés à une solution aqueuse. La solution peptidique finale peut nécessiter des concentrations élevées de solvants organiques pour la dénaturer, et les solvants organiques ne sont généralement pas utilisés pour les études de fonction biologique dans les cellules vivantes.
S, T, E, D, K, R, H, N, Q, Y High content (>75 %) Les séquences polypeptidiques ont tendance à former des réseaux de liaisons hydrogène intermoléculaires redondants et forment facilement des gels dans des solutions aqueuses concentrées. De tels peptides peuvent être solubilisés comme décrit à l'étape 3. Afin de réduire d'éventuels problèmes lors de la dissolution, il est recommandé aux clients d'accorder plus d'attention à la conception et à la séquence afin d'améliorer la solubilité du peptide.